1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。

2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。

3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4.細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

1.標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標準品100μl，然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/L，15 ng/L)。

2.加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置38℃溫育30分鐘。

4. 配液：將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

1． 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2． 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

3． 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6． 底物請避光保存。

7． 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9． 本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標， 在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

試劑盒性能：

1.樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990以上。

2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和11%

1.試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個月

特異性：Hu IL-1a，檢測范圍：3.9pg/ml~250pg/ml，靈敏度：2pg/ml，標本用量：100ul/well。本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法的原理制備，適用于體外定量檢測人血清、血漿、組織、體液或細胞培養(yǎng)上清液中的天然和重組的IL-1a濃度。白介素-1（IL-1）是IL-1α和IL-1β兩種蛋白的統(tǒng)稱，是由不同基因編碼的，但它們識別細胞表面相同的受體。IL-1α和IL-1β結(jié)構(gòu)相似，在氨基酸水平上有25%的同源性；兩種都是由分子量31kDa前體裂解成17.5kDa的蛋白質(zhì)。IL-1α和IL-1β都不包含典型的疏水信號肽，但是有證據(jù)證明一些非典型路徑可以分泌這些因子。大量的IL-1α以前體形式保留在胞內(nèi)。一部分未修飾的IL-1α運輸?shù)郊毎砻娴耘c細胞相連。未修飾的膜結(jié)合IL-1α體現(xiàn)生物活性，鄰近的細胞旁分泌IL-1。IL-1α和IL-1β與特定的受體結(jié)合后發(fā)揮其作用。

特異性：Human IL-2，檢測范圍：7.8pg/ml~500pg/ml，高靈敏度：4pg/ml，高特異性：不與IL-1,3,4,5,6,8,10,12,IFN,TNF,VEGF,TGF及ICAM等反應(yīng)，高重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均<10%，標本用量：100ul/well。本實驗采用雙抗體夾心ELISA法，適用于體外定量檢測人血清、血漿、組織或細胞培養(yǎng)上清液中天然和重組的IL-2濃度。白介素2(IL-2)主要由絲裂原或抗原激活的T淋巴細胞表達的。它在促進抗原特異性增殖的T細胞克隆增殖中起重要作用。另外，IL-2也參與其他不同種類細胞的多個免疫反應(yīng)。IL-2刺激胸腺細胞增殖；刺激激活的B細胞增殖與分化；促進單核細胞的生長、分化與細胞殺傷能力；誘導自然殺傷細胞的生長與刺激這些細胞的細胞因子表達以及細胞殺傷能力；增加淋巴激活殺傷細胞(LAK)的產(chǎn)生；誘導少突膠質(zhì)細胞的增殖與分化。人IL-2的cDNA編碼153個氨基酸糖蛋白前體包含20個氨基酸組成的信號肽，成熟時信號肽被剪切掉。在氨基酸水平序列上，小鼠IL-2與人IL-2的序列同源性達60%。人IL-2可以在小鼠細胞中活化，但是小鼠IL-2不能在人細胞中活化。IL-2基因定位在染色體4q位點。

特異性：Hu IL-2sRa，檢測范圍：62.5pg/ml~4000pg/ml，靈敏度：30pg/ml，標本用量：100ul/well。本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法的原理制備，適用于體外定量檢測人血清、血漿、組織、體液或細胞培養(yǎng)上清液中的天然和重組的IL-2sRa濃度。白介素2（IL-2）是通過結(jié)合多分子細胞受體復合物發(fā)揮生物活力的。多年來，這個受體復合物被認為是由IL-2Rα與IL-2β兩個糖蛋白鏈組成的，兩個亞基相互結(jié)合在一起形成一個高親和力受體來傳遞IL-2信號的。IL-2Rα（也稱為Tac抗原或CD25），是一個分子量為55kD跨膜糖蛋白，有351個氨基酸組成。IL-2β在1989年被克隆出來，它是個由575個氨基酸組成的跨膜糖蛋白，分子量為75kD，其中有286個氨基酸位于胞漿內(nèi)，更顯著地參與了細胞信號傳導作用。常認為它是IL-2一種弱抑制劑。在任何情況下，體液中增高的可溶性IL-2Rα常伴隨這T細胞與B細胞的增加與免疫系統(tǒng)的激活。